Hemm kważi l-kumpaniji kollha li biegħu l-trab tal-enzima bromelainhuwa mħallat mal-papain.Huwa diffiċli li l-bromelain jiġi purifikat għal 5000GDU/g. iżda huwa faċli ħafna li tippurifika l-papain għal 1000,000GDU/g. anke sa 2000,000GDU/g. iżda l-funzjonijiet tal-bromelain huwa differenti mill-papain. il-kulur, ordour, solubilità fl-ilma, u kuntrast togħma mal-prodott falz u prodott veru. Huma differenza t-trab tal-enzima bromelain dritt huwa griż, bla riħa, bla togħma u li ma jinħallx fl-ilma.
Iżda l-bromelain falz għandu l-karatteristiċi li ġejjin:
● Huwa isfar ċar, aromatiku u ħelu ħafif, u jinħall fl-ilma. Hija l-karatteristika tal-papain.
● Jintuża biex inaqqas l-infjammazzjoni u jtaffi l-uġigħ. iżda kważi m'hemm l-ebda dawn il-funzjonijiet fil-papain.
● Jintuża bħala suppliment tad-dieta biss, mhux addittiv ta 'l-ikel, iżda tabilħaqq jista' jkun ta 'grad farma. Iżda l-papain jintuża biss bħala trab u kożmetiċi li jsejħu l-laħam.
Aħna ttestjaw il-bromelain skond il-ġel SDS-PAGE u l-metodi ANALITIKA TAL-UNITÀ DIĠESTJONI TAL-ĠELATIN u HPLC, hemm inqas molekuli fil-mira fil-metodu tal-ġel SDS-PAGE għal prodott falz.
Dawn li ġejjin huma r-riżultati tal-elettroforesi tal-Paġni SDS
Il-speckle f'hawn fuq juri li l-prodott it-tajjeb biss għandu l-istess speckle fuq il-post it-tajjeb fl-istampa, iżda l-prodott falz għandu ftit speckles fuqu, dan ifisser li l-piż molekulari bilkemm jidher.
Il-piż molekulari ta 'Bromelain huwa ta' madwar 33000, iżda l-piż molekulari ta 'papain huwa 21000. U l-Kromatogramma HPLC:
Se tara li l-estratt it-tajjeb biss fih il-piżijiet molekulari t-tajbin tal-bromelain u huwa skopert mill-HPLC.
Imma jekk aħna ttestjati biss bil-Metodu Analitiku tal-Unità tad-Diġestjoni tal-Ġelatina (GDU) ara l-Anness II. Kemm il-prodott it-tajjeb kif ukoll il-prodott falz għandhom l-istess riżultati bħal hawn taħt:
Zokk tal-ananas huwa irħas ħafna, u r-rata minn zokk għal bromelain hija baxxa ħafna, hemm xi tniġġis fil-proċess tal-manifattura.
Kważi l-fabbrika kollha tat-trab tal-enżima tal-bromelain huma qrib il-qasam. Huma jużaw zokk frisk. Huwa impossibbli li ttrasporta z-zokk f'distanza twila. Il-materja prima għandha tiġi ttrattata kemm jista 'jkun malajr meta tinġabar mill-għalqa jew għandha tinħażen f'ambjent ta' temperatura baxxa (4-8 grad ) biex tiġi evitata d-degradazzjoni tal-proteini. Fil-ħajja reali, il-manifattur fil-fatt ma jistax jissodisfa xi waħda miż-żewġ kundizzjonijiet ta 'hawn fuq minħabba wisq ta' zkuk ananas. Il-metodu raġonevoli huwa bilanċ bejn il-ħin tal-immaniġġjar u t-telf tal-attività tal-proteini. Normalment, il-manifattura tal-materja prima mhux raffinata fl-istaġun tal-ħsad tal-ananas, u aħżen il-materja prima mhux raffinata f'ambjent ta 'temperatura baxxa (4-8 grad ).
Qed nagħmlu xi test dwar l-elettroforesi tal-Paġni SDS, Fit-teorija nistgħu ngħollu għal 10,000 jew 20,000.iżda se tkun għalja ħafna. 5000GDU/g u tagħmilha stabbli forsi fuq appoġġ malto / wieħed mikroinkapsulat jew xi ħaġa flimkien ma 'estrazzjoni/purifikazzjoni ta' grad organiku.
Anness I
● Metodu 5 elettroforeżi tal-ġel tal-polyacrylamide SDS (SDS-PAGE)
SDS-PAGE huwa metodu ta 'elettroforeżi tal-ġel tal-polyacrylamide żnaturat. Il-prinċipju tas-separazzjoni tal-proteini f'dan il-metodu huwa bbażat fuq il-fatt li ħafna mill-proteini jistgħu jingħaqdu mas-surfactant anjoniku sodium dodecyl sulfate (SDS) fi proporzjon tal-piż biex jiffurmaw kumpless.
Il-ħlas negattiv li jinġarr mill-molekuli tal-proteini jaqbeż ħafna l-ħlas nett tal-molekuli tal-proteini naturali, u jelimina l-effett ta 'ċarġ ta' molekuli ta 'proteini differenti u jissepara l-proteini skont id-daqs molekulari tagħhom.
Dan il-metodu jintuża għall-identifikazzjoni kwalitattiva, il-kontroll tal-purità u l-impurità, u d-determinazzjoni kwantitattiva tal-proteini.
1 Apparat tal-istrument
Vultaġġ kostanti jew provvista ta 'enerġija ta' kurrent kostanti, tank tal-elettroforeżi tal-pjanċa vertikali, u moffa li tagħmel kolla.
2. Reaġenti
(1) Ilma.
(2) Buffer tal-ġel tas-separazzjoni (4x, soluzzjoni A) 1.5mol/L trihydroxymethyl aminomethane hydrochloric acid buffer. Iżen 18.15g ta 'trihydroxymethyl aminomethane u dewweb b'ammont xieraq ta' ilma. Aġġusta l-valur tal-pH għal 88 bl-aċidu idrokloriku u ħallat għal 100ml bl-ilma.
(3) Iżen 58.0g ta 'akrilammid u 20g ta' N, N '- methylene bisacrylamide f'soluzzjoni ta '30 fil-mija ta' akrilamid (soluzzjoni B), dewweb f'ilma sħun u ħallat għal 200ml, iffiltra b'karta tal-filtru (maħżuna f' skur).
(4) Iżen 10g ta 'sodium dodecyl sulfate f'10 fil-mija soluzzjoni SDS (soluzzjoni C), dewweb fl-ilma, u ħallat għal 100ml
(5) Reaġent ta 'kummerċjalizzazzjoni ta' soluzzjoni ta 'tetramethylethylenediamine (soluzzjoni TEMED, D).
Soluzzjoni ta '10 fil-mija ta' persulfat ta 'ammonju (soluzzjoni E) Iżen 10g ta' persulfat ta 'ammonju, dewweb fl-ilma, u ħallat għal 100ml. Huwa rakkomandat li tippreparaha qabel l-użu jew taħżen separatament fi grad -20 għal ġimgħatejn.
(7) Buffer tal-gomma kkonċentrat (4 ×, soluzzjoni F) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethane Hydrochloric acid buffer, iżen 6.05g ta 'Trihydroxymethylaminomethane, żid ammont xieraq ta' ilma biex jinħall, aġġusta l-valur tal-pH għal 6.8 b'hydrochloric aċidu, u ħallat bl-ilma għal 100ml.
(8) Buffer ta 'l-elettrodu (10 ×) Iżen 30g ta' trimethylaminomethane, 144g ta 'glycine, u 10g ta' sodium dodecyl sulfate, ħollhom fl-ilma u ħallat għal madwar 800ml. Aġġusta l-valur tal-pH għal 8.1-8.8 bl-aċidu idrokloriku, u ħallat għal 1000ml bl-ilma.
(9) Buffer tal-kampjun mhux imnaqqas (4 ×) Iżen 303g ta 'trimethylaminomethane, 20mg ta' bromophenol blu, u 8.0g ta 'sodium dodecyl sulfate, kejjel 40ml ta' glycerol, dewweb fl-ilma u ħallat għal madwar 80ml. Aġġusta l-pH għal 68 bl-aċidu idrokloriku, u ħallat għal 100ml bl-ilma.
(8) Buffer ta 'l-elettrodu (10 ×) Iżen 30g ta' trimethylaminomethane, 144g ta 'gliċina, u 10g ta' sodium dodecyl sulfate, dewweb fl-ilma u ħallat għal madwar 800ml. Aġġusta l-valur DH għal 81-88 bl-aċidu idrokloriku, u ħallat għal 1000ml bl-ilma
(9) Buffer tal-kampjun mhux imnaqqas (4 ×) Iżen 3.03g ta 'trimethylaminomethane, 20mg ta' bromophenol blue, u 80g ta 'sodium dodecyl sulfate, kejjel 40ml ta' glycerol, dewweb fl-ilma, u ħallat għal madwar 80ml. Aġġusta l-pH għal 6.8 bl-aċidu idrokloriku, u ħallat għal 100ml bl-ilma.
(10) Buffer tas-sustanza tat-test imnaqqas (4 ×) Iżen 3.03g ta’ trimethylaminomethane, 20mg ta’ bromophenol blue, u 80g ta’ sodium dodecyl sulfate, kejjel 40ml ta’ glycerol, dewweb u ħallat bl-ilma sa madwar 80ml, u żid - 20ml mercaptoethanol, aġġusta l-pH għal 6.8 bl-aċidu idrokloriku, iddilwixxi bl-ilma għal 100ml (jew 3.03g ta 'trimethylaminomethane, 20mg ta' bromophenol blue, 8.0g ta 'sodium dodecyl sulfate, kejjel 40ml ta' glycerol, dewweb fl-ilma u dilu. għal 80ml, aġġusta l-pH għal 6.8 b'aċidu idrokloriku, iddilwixxi bl-ilma għal 100ml, u qabel l-użu, żid dithiothreitol sa 100mmol/L).
● Anness II
Unità tad-Diġestjoni tal-Ġelatina Metodu Analitiku (GDU)
A. Għan: Din il-proċedura tintuża biex tiddetermina l-attività proteolitika tat-Trab tal-Enżima Bromelain.
B. Tagħmir:
1. Miter tal-pH
2. Banju tal-ilma b'temperatura kostanti f'45.0 grad ± 0.1 grad
3. Bilanċ Analitiku
4. Kunjetti volumetriċi
5. Pipetti volumetriċi
6. Timer
7. Buretta Diġitali (Eżattezza ta' 0.1 ml)
8. Barnuża tad-dħaħen
9. Pipettaturi Awtomatiċi
C. Prekawzjonijiet tas-Sigurtà:
Dan it-test għandu jsir fil-kappa tad-dħaħen.
1. Uża prattiki standard tas-sigurtà tal-laboratorju.
2. Formaldehyde: Ipprepara u żomm f'kappa tad-dħaħen il-ħin kollu. Karċinoġenu u teratoġen magħruf.
3. Perossidu: Ossidatur qawwi
D. Reaġenti u preparazzjonijiet tar-Reaġenti:
1. Ilma distillat: bejn wieħed u ieħor 500 ml: aġġusta għal pH ta' 4.5 b'0.1 N HCI.
2. Sostrat tal-ġelatina:
a. Dewweb 25 gramma ta 'ġelatina (Mikrobiologie. 1.04070) fi 375 ml ilma sħun, ħallih jagħli. Kessaħ għal 45 grad.
b. Aġġusta l-pH għal 4.5 bi 0.1 N HCI u ħallat għal 500 ml pH 4.5 ilma distillat.
c. Żomm is-sottostrat tal-ġelatina f'45 grad.
3. Soluzzjoni Buffer:
a. Żid 15 gm NaCl bil-mod ma' 40-50 ml ilma f'tazza ta' 150ml u ħawwad biex tinħall.
b. Żid 0.570 ml aċidu aċetiku.
c. Aġġusta l-pH għal 4.5 bi 0.2N HCL (il-volum ikun akbar minn 100ml.)
4. 3 fil-mija Hydrogen peroxide:
a. Pipetta 2.5 ml ta’ 30 fil-mija Hydrogen peroxide (soluzzjoni stokk) fi flixkun volumetriku ta’ 25 ml u ħallat sal-volum b’ilma distillat ta’ pH 4.5
5. 37 fil-mija Formaldehyde pH 9.0: a. Aġġusta volum suffiċjenti (100 ml) ta’ formaldehyde għal pH 9.0 b’0.1 N NaOH (madwar 20 ml ta’ formaldehyde għal kull kampjun qabel l-aġġustament tal-pH.)
Metodu Analitiku tal-Unità tad-Diġestjoni tal-Ġelatina (GDU) - kont.
6. 0.100 N NaOH: (Mixtri standardizzat) a. Soluzzjoni stokk: standardizzata f'0.100 N
E. Proċedura:
1. Preparazzjoni ta 'enżimi:
a. Kalkolu tal-Preparazzjoni tal-Enżimi
Piż {{0}}/Attività fil-mira (madwar 0.05 g jew 50 mg)
A. Iżen l-enzima preċiżament fi flixkun volumetriku ta' 50 ml
B. Żid 8.3 ml ta' soluzzjoni buffer.
b. Ħallih joqgħod għal 30 minuta f'temperatura tal-kamra.
C. Iddilwa sa 50 ml bl-użu ta' ilma distillat ta' pH 4.5, żid ħawwad żgħir u ħawwad għal 10 sa 15-il minuta addizzjonali
2. Proċedura tal-Enżima:
a. Pipetta 25 ml ta’ sottostrat tal-Ġelatina f’kull wieħed miż-żewġ beakers ta’ 100 ml li jkun fihom ħawwad bars u poġġihom f’banju ta’ l-ilma f’45 grad għal 5 minuti, waħda għas-Soluzzjoni tat-Test u l-oħra għas-Soluzzjoni Blank.
b. Soluzzjoni tat-Test:
1) Żid 1.0 ml ta' soluzzjoni ta' trab tal-enżima tal-bromelain fil-beaker magħżul għas-soluzzjoni tat-test, ibda l-ħin u dawwar.
2) Wara eżattament 20 minuti ta' inkubazzjoni f'45 grad, żid 0.1 ml ta' 3 fil-mija perossidu tal-idroġenu u dawwar.
3) Inkuba għal 5 minuti oħra.
4) Neħħi t-tazza mill-banju ta' l-ilma u b'taħwid kostanti daħħal is-sonda tal-pH.
5) Irreġistra l-pH wara 10 sekondi (pH inizjali)
6) Aġġusta għal pH 6.0 bi 0.1 N NaOH. (Madwar 2-4 ml)
*Nota: Meta taġġusta l-pH għal 6.0 kun kawt f'pH 5.8; il-pH jiżdied bil-mod u żidiet minuti ta 'NaOH f'dan il-punt se jżidu b'mod sinifikanti l-pH.
7) Tkompli tħawwad kostanti, żid 10 ml ta' 37 fil-mija formaldehyde pH 9.0.
8) Irreġistra l-pH wara 10 sekondi u minuta.
9) Ittitra għal pH 9.0 bi 0.1 N NaOH.
10) Irreġistra l-volum tat-titrazzjoni.
Dan huwa t-titer tat-test, T. c.
Soluzzjoni Blank: Is-Soluzzjoni Blank għandha titħaddem fl-istess ħin mas-soluzzjoni tat-Test. Dan jitwettaq billi tinbeda d-determinazzjoni tas-Soluzzjoni Blank 12-il minuta wara li tinbeda s-Soluzzjoni tat-Test. Dan jagħtik ħin biex tlesti l-assaġġ fuq is-Soluzzjoni tat-Test qabel ma jkollok tipproċedi bis-Soluzzjoni Blank. 1) Żid 0.1 ml ta' 3 fil-mija perossidu ta' l-idroġenu mat-tazza indikata għas-soluzzjoni vojta u dawwar.
2) Wara eżattament 20 minuti ta' inkubazzjoni f'45 grad żid 1.0 ml ta' soluzzjoni ta' bromelain u dawwar.
3) Inkuba għal 5 minuti oħra.
METODU ANALITIKA TAL-UNITÀ TA’ DIĠESTJONI TAL-ĠELATINA (GDU) - kont.
4) Neħħi t-tazza mill-banju ta' l-ilma u b'taħwid kostanti daħħal is-sonda tal-pH.
5) Irreġistra l-pH wara 10 sekondi (pH inizjali)
6) Aġġusta għal pH 6.0 bi 0.1 N NaOH. (Madwar 2-4 ml)*Ara n-Nota hawn fuq.
7) Tkompli tħawwad kostanti, żid 10 ml ta' 37 fil-mija formaldehyde pH 9.0.
8) Irreġistra l-pH wara 10 sekondi u minuta.
9) Ittitra għal pH 9.0 bi 0.1 N NaOH.
10) Irreġistra l-volum tat-titrazzjoni. Dan huwa t-titru vojt, B.
F. Kalkolu:
1. Definizzjoni: Unità waħda tad-diġestjoni tal-ġelatina hija dak l-ammont ta 'enzima li se jillibera, wara 20 minuta diġestjoni f'45 grad, 1 mg ta' nitroġenu amminiku minn soluzzjoni standard tal-ġelatina f'pH 4.5 jew pH 5.5 (GDU pH 4.5 jew pH 5.5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Fejn: T=Titer tat-test (ml 0.1 N NaOH) B=Titru vojt (ml 0.1 N NaOH) N=Normalità ta' NaOH standardizzat (ie 0.100) Wt (g)=Piż inizjali tal-enzima
G. Parametri tal-Ittestjar:
1. Il-preparazzjonijiet tal-enżimi huma dilwiti għal konċentrazzjoni ta' madwar 0.001 g/ml (1 mg/ml) jew għal konċentrat ta' trab tal-enżimi tal-bromelain madwar 1-2 GDU/ml. Materjal ta' Referenza jiġi ttestjat ma' kull ġirja biex tiġi żgurata l-eżattezza tal-metodu.
Guanjie jipprovdi trab tal-bromelain bl-ingrossa, bl-użu tal-metodu tat-test GDU. Il-proċess ta 'produzzjoni tagħna jopera taħt workshops standard CGMP, li juża tliet linji ta' produzzjoni f'żewġ fabbriki, u żewġ laboratorji indipendenti. Għal kwalunkwe mistoqsija dwar il-prodotti tagħna, jekk jogħġbok ikkuntattjana fuqinfo@gybiotech.com.
